Meios de Cultura Bacteriológicos

É importante que o profissional conheça cada meio de cultura e os adeque ao perfil bacteriano esperado para cada material.

Alguns procedimentos são essenciais na hora da preparação de cada meio de cultura para a obtenção de melhores resultados e evitar contaminações.

O processo de autoclavação deve ser realizado sempre a 121ºC durante 15 minutos, sob pressão de 1 atm.

Quando distribuir o meio antes de autoclavar, os tubos não precisam estar esterilizados; quando distribuir o meio após a autoclavação, os tubos, frascos, placas, pipetas e vidrarias ou materiais auxiliares obrigatoriamente devem ser estéreis e os meios devem ser autoclavados com as tampas semi-abertas, para que a esterilização seja por igual em todo o conteúdo dos tubos. 

Vejamos abaixo os meios de cultura mais utilizados na rotina clínica de bacteriologia:

Ágar nutriente
Meio relativamente simples, de fácil preparo e barato, muito usado nos procedimentos do laboratório de microbiologia.

Utilidade: análise de água, alimentos e leite como meio para cultivo preliminar das amostras submetidas à exames bacteriológicos e isolamento de organismos para culturas puras, conservação e manutenção de culturas em temperatura ambiente, como método opcional para os laboratórios que não dispõem do método da criopreservação (congelamento das cepas em freezer à - 80ºC) e observação da esporulação de espécies de bacilos Gram positivos.

Cor original do meio: branco opalescente

Positivo: Crescimento na superfície do ágar;
Negativo: Ausência de crescimento.

Ágar Sangue de Carneiro (5%)
O meio, usando uma base rica formada a partir do Ágar Mueller-Hinton, oferece ótimas condições de crescimento a maioria dos microrganismos. A conservação dos eritrócitos íntegros favorecem a formação de halos de hemólise nítidos, úteis para a diferenciação de Streptococcus spp. e Staphylococcus spp.

É utilizado no isolamento de microrganismos não fastidiosos, verificação de hemólise dos Streptococcus spp. e Staphylococcus spp. e usado na prova de satelitismo (para identificação presuntiva de Haemophilus spp.).

A cor original do meio é vermelho.

Beta hemólise: presença de halo transparente ao redor das colônias semeadas (lise total dos eritrócitos).

Alfa hemólise: presença de halo esverdeado ao redor das colônias semeadas (lise parcial dos eritrócitos).

Gama hemólise (sem hemólise): ausência de halo ao redor das colônias (eritrócitos permanecem íntegros).

 

Ágar chocolate
Utilizado para o cultivo de microrganismos exigentes, embora cresçam neste meio quase todos os tipos de microrganismos. À base do meio, é adicionado sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz com que as hemácias lisem, liberando hemina e hematina, compostos fundamentais para o crescimento dos microrganismos exigentes.

É utilizado no crescimento de microrganismos exigentes Haemophilus spp., Neisseria spp., Branhamella catarrhalis e Moraxella spp.

A cor original do meio é castanho escuro (chocolate).

Ágar MacConkey
O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram positivos especialmente enterococos e estafilococos. A concentração de sais de bile é relativamente baixa em comparação com outros meios, por isso não é tão seletivo para Gram negativos como, por exemplo, o ágar SS.

É utilizado para isolar bacilos Gram negativos (enterobactérias e não fermentadores) e verificar a fermentação ou não da lactose.

Cor original do meio: rosa avermelhado.

Colônias cor de rosa: fermentadoras de lactose.

Colônias incolores: não fermentadoras de lactose.

 

Ágar Salmonella-Shigella (SS)
Possui componentes (sais de bile, verde brilhante e citrato de sódio) que inibem microrganismos Gram positivos. A incorporação de lactose ao meio permite diferenciar se o microrganismo é lactose positiva (bactérias que fermentam a lactose produzem ácido que na presença do indicador vermelho neutro resultando na formação de colônias de cor rosa), e bactérias que não fermentam a lactose formam colônias transparentes. Tissulfato de sódio e o citrato férrico permitem a detecção de H²S evidenciado por formação de colônias de cor negra no centro.

É utilizado para selecionar e isolar espécies de Salmonella e Shigella, em amostras de fezes, alimentos e água.

Cor original do meio: vermelho alaranjado.

Colônias com centro negro (H2S) ou colônias incolores: suspeita de Salmonella.

Colônias incolores: suspeita de Shigella spp.

Colônias cor de rosa ou vermelho: suspeita de Escherichia coli ou Klebsiella spp.

As bactérias não fermentadoras de lactose são incolores.

As bactérias fermentadoras de lactose aparecem na cor rosa.

Ágar Hektoen enteric (HE)
Os sais biliares e os corantes azul de bromotimol e fucsina ácida inibem o crescimento da maioria dos microrganismos Gram positivos. Lactose, sacarose e salicina fornecem carboidratos fermentáveis ​​para incentivar o crescimento e diferenciação de enterobactérias. É utilizado para isolar e diferenciar os membros da espécie Salmonella e Shigella de outros Enterobacteriaceae.
Cor original do meio: azul-esverdeado
Colônias amarelas a salmão: enterobactérias fermentadoras de carboidratos.
Colônias azuis-esverdeadas com ou sem centro preto: suspeita de Salmonella spp. e Shigella spp.

 

Ágar Cystine Lactose Electrolyte Deficient (CLED)
Usado para isolamento e quantificação de microrganismos presentes em amostras urina. A deficiência de eletrólitos inibe o véu de cepas de Proteus.

É utilizado para isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e leveduras.

Cor original do meio: azul claro.

Colônias lactose positiva: cor amarela.

Colônias lactose negativa: cor azul.

 

Ágar Thayer-Martin
É um meio rico e superior a outros meios de cultivo destinados para o isolamento de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria meningitidis, pois contém em sua fórmula antibióticos que inibem o crescimento de Neisserias saprófitas e outras bactérias, quando em amostras colhidas de sítios contaminados.

É utilizado para o isolamento seletivo de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria meningitidis, a partir do material de investigação.

Cor original do meio: marrom-chocolate

Colônias pequenas e opacas: suspeita de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria meningitidis.

 

Ágar Löwenstein-Jensen
A base do meio é constituída por ovos integrais, o que permite amplo crescimento das micobactérias e o crescimento é satisfatório para o teste de niacina (que é positivo para Mycobacterium tuberculosis).

É utilizado no Isolamento primário das micobactérias.

Cor original do meio: verde claro

Positivo: Crescimento de colônias amarelas

Negativo: ausência de crescimento.

  

Ágar Mueller-Hinton
Meio padronizado por Kirby & Bauer e pelo CLSI que oferece condições de crescimento das principais bactérias.

É utilizado na realização do teste de avaliação da resistência aos antimicrobianos pelos métodos de difusão em disco e E-test para enterobactérias, não fermentadores, Staphylococcus e Enterococcus sp.

Cor original do meio: amarelo palha.

A zona do diâmetro é particular para cada antibiótico e organismo, sendo comparado com diâmetros padronizados pelo CLSI, que determina cada microrganismo sendo sensível, intermediário ou resistente.